# US 2014/0193866 A1 · Compositions and Methods for Making and Modifying Oils

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- Number: US 2014/0193866 A1
- Document ID: US20140193866A1
- Status: Published application
- Kind: A1
- Application number: 13/902,739
- Filed: 2013-05-24
- Published: 2014-07-10
- Earliest claimed: 2004-09-10
- Assignees: Dsm IP Assets B.V.
- Inventors: David Lam; David Weiner; Tim S. Hitchman; Nelson R. Barton; Jonathan D. Lyon
- Web page: https://patentgrep.com/patent/US20140193866A1

## CPC

- C12P 7/6418: by hydrolysis of fatty acid esters
- C12P 7/6427: Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P 7/6431: Linoleic acids [18:2[n-6]]
- C12P 7/6432: Eicosapentaenoic acids [EPA]
- C12P 7/6434: Docosahexenoic acids [DHA]
- C12P 7/6454: by esterification
- C12P 7/6458: by transesterification, e.g. interesterification, ester interchange, alcoholysis or acidolysis
- C12P 7/6472: containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P 7/6481: Phosphoglycerides (phosphoglycerides having carboxylic acids with less than seven carbon atoms C12P7/62)
- C12P 7/649: Biodiesel, i.e. fatty acid alkyl esters
- Y02E 50/10: Biofuels, e.g. bio-diesel
- C12P: FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE {(brewing of beer C12C; producing vinegar C12J; producing specific peptides or proteins C07K; producing enzymes C12N9/00; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification C12N15/00; measuring or testing processes involving enzymes or microorganisms C12Q; measuring or testing processes involving nucleic acid amplification reactions C12Q1/6844; fermentation processes to form a food composition, A21 or A23; compounds in general, see the relevant compound class, e.g. C01, C07)}
- Y02E: REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION

## Abstract

The invention provides novel methods for making or modifying oils, e.g., plant animal or microbial oils, such as vegetable oils or related compounds, that are low in a particular fatty acid(s), for example, low linoleic oils, linolenic oils, low palmitic oils, low stearic oils or oils low in a combination thereof.

## Claims

### Claim 1

A method for making an oil or a lipid low in a particular fatty acid species comprising
(a) providing an oil or a lipid comprising at least one species of fatty acid;
(b) providing an enzyme capable of selectively hydrolyzing (releasing) one or more particular fatty acid species of (a) from the oil or lipid; and
(c) contacting the oil or lipid of (a) with the enzyme of (h) under conditions wherein the enzyme selectively hydrolyzes at least one fatty acid species molecule, thereby making an oil or a lipid having at least one fewer fatty acid species molecule.

### Claim 2

A method for generating one or more fatty acid species comprising
(a) providing an oil or a lipid comprising at least one species of fatty acid;
(b) providing an enzyme capable of selectively hydrolyzing (releasing) one or more particular fatty acid species of (a) oil or a lipid; and
(c) contacting the oil or lipid of (a) with the enzyme of (h) under conditions wherein the enzyme selectively hydrolyzes at least one fatty acid species molecule from the oil or lipid, thereby releasing the fatty acid species from the oil or lipid and generating the fatty acid species.

### Claim 3 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the enzyme hydrolyzes all of the fatty acid species in the oil or lipid, thereby producing an oil or lipid completely lacking the fatty acid species of (a).

### Claim 4 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the oil comprises a plant oil, an animal oil or a microbial oil.

### Claim 5 (depends on 4)

The method of claim 4, wherein the plant oil comprises a vegetable oil.

### Claim 6 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the oil is derived from a plant oil, a high phosphorous oil, a soy oil, a canola oil, a palm oil, a cottonseed oil, a corn oil, a palm kernel-derived oil, a rice bran oil, a coconut oil, a peanut oil, a sesame oil, a fish oil, an algae oil, a sunflower oil, an essential oil, a fruit seed oil, a grapeseed oil, an apricot oil, or a borage oil.

### Claim 7 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the lipid comprises a glyceride, a glycolipid, a phospholipid, a sphingolipid, a coenzyme A, an oxidized lipid or an ether lipid.

### Claim 8 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the at least one species of fatty acid of step (a) is linoleic acid (cis-9, cis-12-octadecadienoic acid), linolenic acid, palmitic acid or stearic acid.

### Claim 9 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the at least one species of fatty acid of step (a) is a saturated fatty acid.

### Claim 10 (depends on 9)

The method of claim 9, wherein the saturated fatty acid is butyric acid, valeric acid, caproic acid, caprylic acid, pelargonic acid, capric acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, margaric (daturic) acid, stearic acid, arachidic acid, behenic acid, lignoceric acid or cerotic acid.

### Claim 11 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the at least one species of fatty acid of step (a) is a monoenoic fatty acid.

### Claim 12 (depends on 11)

The method of claim 11, wherein the monoenoic fatty acid is obtusilic acid, caproleic acid, lauroleic acid, linderic acid, myristoleic acid, physeteric acid, tsuzuic acid, palmitoleic acid, petroselinic acid or oleic acid.

### Claim 13 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the at least one species of fatty acid of step (a) is a polyenoic fatty acid (polyunsaturated fatty acid, or PUFA).

### Claim 14 (depends on 13)

The method of claim 13, wherein the polyenoic fatty acid is eicosapentaenoic acid, linoleic acid, γ-linolenic acid, dihomo-γ-linolenic acid, arachidonic acid, 7,10,13,16-docosatetraenoic acid, 4,7,10,13,16-docosapentaenoic acid, α-linolenic acid (9,12,15-octadecatrienoic acid), stearidonic acid, 8,11,14,17-eicosatetraenoic acid, 5,8,11,14,17-eicosapentaenoic acid (EPA), 7,10,13, 16,19-docosapentaenoic (DPA), 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid (DHA), or 5,8,11-eicosatrienoic.

### Claim 15 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the at least one species of fatty acid of step (a) is a branched chain fatty acid, a branched methoxy fatty acid, a ring-containing fatty acid, an acetylenic fatty acid, a hydroxy fatty acid, a fatty acid amide, a keto fatty acid or a halogenated fatty acid.

### Claim 16 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the enzyme capable of selectively hydrolyzing the fatty acid species of (a) is a hydrolase, a lipase, a phospholipase, an esterase, an oxidoreductase, a chlorophyllase or a glycosidase.

### Claim 17 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the enzyme capable of selectively hydrolyzing the fatty acid species is a polypeptide comprising a sequence (i) having at least 50% sequence identity to SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ ID NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:116, 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### Claim 18 (depends on 17)

The method of claim 17, wherein the sequence identity is over a region of at least about at least about 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, or more or is 100% sequence identity.

### Claim 19 (depends on 17)

The method of claim 17, wherein the sequence identity is over a region of at least about 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050 or more residues, or the fill length of an enzyme.

### Claim 20 (depends on 18)

The method of claim 18, wherein the polypeptide has a sequence as set forth in SEQ NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:303 SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:70, SEQ ID NO:72, SEQ NO:74, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:80, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:84, SEQ NO:86, SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:90, SEQ NO:92, SEQ ID NO:94, SEQ ID NO:96, SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:100, SEQ ID NO:102, SEQ ID NO:104, SEQ ID NO:106, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:11.6, SEQ ID NO:1183 SEQ ID NO:120, SEQ ID NO:122, SEQ ID NO:124, SEQ ID NO:126, SEQ ID NO:128, SEQ ID NO:1303 SEQ ID NO:132, SEQ ID NO:134, SEQ ID NO:136, SEQ ID NO:138, SEQ ID NO:140, SEQ ID NO:142, SEQ ID NO:143, SEQ ID NO:146, SEQ ID NO:148, SEQ ID NO:150, SEQ ID NO:152, SEQ NO:154, SEQ ID NO:156, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:162, SEQ ID NO:164, SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:170, SEQ ID NO:172, SEQ ID NO:174, SEQ ID NO:176, SEQ ID NO:178, SEQ ID NO:180, SEQ ID NO:182, SEQ ID NO:184, SEQ ID NO:186, SEQ ID NO:188, SEQ ID NO:190, SEQ ID NO:192, SEQ ID NO:194, SEQ ID NO:196, SEQ ID NO:198, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:202, SEQ ID NO:204, SEQ ID NO:206, SEQ ID NO:208, SEQ ID NO:210, SEQ ID NO:212, SEQ ID NO:214, SEQ ID NO:21.6, SEQ ID NO:218, SEQ ID NO:220, SEQ ID NO:222, SEQ ID NO:224, SEQ ID NO:226, SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:230, SEQ ID NO:232, SEQ ID NO:234, SEQ ID NO:236, SEQ ID NO:238, SEQ ID NO:240, SEQ NO:242, SEQ NO:244, SEQ ID NO:246, SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:250, SEQ ID NO:252, SEQ ID NO:254, SEQ ID NO:256, SEQ ID NO:258, SEQ ID NO:260, SEQ ID NO:262, SEQ ID NO:264, SEQ ID NO:266, SEQ ID NO:268, SEQ ID NO:270, SEQ ID NO:272, SEQ ID NO:274, SEQ ID NO:276, SEQ ID NO:278, SEQ ID NO:280, SEQ ID NO:282, SEQ ID NO:284, SEQ ID NO:286, SEQ ID NO:288, SEQ ID NO:290, SEQ ID NO:292, SEQ ID NO:294, SEQ ID NO:296, SEQ ID NO:298, SEQ ID NO:300, SEQ ID NO:302, SEQ ID NO:304, SEQ ID NO:306, SEQ ID NO:308, SEQ ID NO:310, SEQ ID NO:312, SEQ ID NO:314, SEQ ID NO:316, SEQ ID NO:318, SEQ ID NO:320. 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### Claim 21 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein contacting conditions comprise higher water conditions for the selective hydrolysis reaction.

### Claim 22 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein contacting conditions comprise reaction conditions comprising a pH in the range of about 4 to about 10.

### Claim 23 (depends on 1)

The method of claim 1, further comprising removing from the oil the hydrolyzed (released) fatty acid.

### Claim 24 (depends on 23)

The method of claim 23, wherein the hydrolyzed fatty acid is removed from the oil by steam distillation.

### Claim 25 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the enzyme is added to the oil before, during or after a degumming step, or any combination thereof.

### Claim 26 (depends on 23)

The method of claim 23, wherein the hydrolyzed fatty acid is removed from the oil by a saponification reaction or use of a silica.

### Claim 27 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the oil or lipid of (a) is comprises a waste stream, a restaurant grease, an animal processing by-product, an animal feed bypass fat, or an impure or mixed source of plant, animal, microbial oil.

### Claim 28 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the provided enzyme specifically hydrolyzes fatty acids having various degrees of saturation.

### Claim 29 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the provided enzyme has mono-, di-, or triglyceride selectivity to fatty acids.

### Claim 30 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the provided enzyme has cis- versus trans-fatty acid specificity.

### Claim 31 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the provided enzyme has conjugated versus unconjugated fatty acid specificity.

### Claim 32 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the provided enzyme has fatty acid chain length specificity.

### Claim 33 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the provided enzyme specifically hydrolyzes oxidized lipids or non-oxidized lipids.

### Claim 34 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the provided enzyme has regioselective catalytic activity.

### Claim 35 (depends on 34)

The method of claim 34, wherein the regioselective catalytic activity comprises selective Sn-1 versus Sn-2 versus Sn-3 reactivity.

### Claim 36 (depends on 1)

The method of claim 1, wherein the provided enzyme has positionally selective catalytic activity.

### Claim 37

A method for making a confectionary fat low in a particular fatty acid species comprising
(a) providing a confectionary fat comprising an oil or a lipid comprising at least one species of fatty acid;
(b) providing an enzyme capable of selectively hydrolyzing (releasing) the fatty acid species of (a) from the oil or lipid;
(c) contacting the confectionary fat of (a) with the enzyme of (b) under conditions wherein the enzyme selectively hydrolyzes at least one fatty acid species molecule, thereby making a confectionary fat having at least one fewer fatty acid species molecule.

### Claim 38

A method for making a synthetic lubricant or fuel fat low in a particular fatty acid species comprising
(a) providing a synthetic lubricant comprising an oil or a lipid comprising at least one species of fatty acid;
(b) providing an enzyme capable of selectively hydrolyzing (releasing) the fatty acid species of (a) from the oil or lipid;
(c) contacting the synthetic lubricant of (a) with the enzyme of (b) under conditions wherein the enzyme selectively hydrolyzes at least one fatty acid species molecule, thereby making a synthetic lubricant having at least one fewer fatty acid species molecule.

### Claim 39 (depends on 38)

The method of claim 38, wherein the provided enzyme specifically hydrolyzes unsaturated fatty acids, thereby generating a stable lubricant.

### Claim 40

A method for making a paint or coating low in a particular fatty acid species comprising
(a) providing a paint or coating comprising an oil or a lipid comprising at least one species of fatty acid;
(b) providing an enzyme capable of selectively hydrolyzing (releasing) the fatty acid species of (a) from the oil or lipid; and
(c) contacting the paint or coating of (a) with the enzyme of (b) under conditions wherein the enzyme selectively hydrolyzes at least one fatty acid species molecule, thereby making a paint or coating having at least one fewer fatty acid species molecule.

### Claim 41

A method for making a synthetic fuel comprising an oil or a lipid comprising a particular fatty acid species comprising
(a) providing a synthetic fuel comprising an oil or a lipid comprising at least one species of fatty acid;
(b) providing an enzyme capable of selectively hydrolyzing (releasing) the fatty acid species of (a) from the oil or lipid; and
(c) contacting the synthetic fuel of (a) with the enzyme of (b) under conditions wherein the enzyme selectively hydrolyzes at least one fatty acid species molecule, thereby making, a synthetic fuel having at least one fewer fatty acid species molecule.

### Claim 42

A method for making an oil or a lipid comprising a particular fatty acid species comprising
(a) providing an oil or a lipid and a particular fatty acid species;
(b) providing an enzyme capable of selectively adding (esterifying) the fatty acid species of (a) to the oil or lipid; and
(c) contacting the oil or lipid of (a) with the enzyme of (b) under conditions wherein the enzyme selectively adds (esterifies) at least one fatty acid species molecule, thereby making an oil or a lipid having at least one additional fatty acid species molecule.

### Claim 43

A method for making an oil or a lipid low comprising a particular fatty acid species comprising
(a) providing a glycerol and a particular fatty acid species;
(b) providing an enzyme capable of selectively adding esterifying) the fatty acid species of (a) to the glycerol; and
(c) contacting the glycerol with the enzyme of (b) under conditions wherein the enzyme selectively adds (esterifies) at least one fatty acid species molecule, thereby making an oil or a lipid having at least one additional fatty acid species molecule.

### Claim 44

A method for making a composition comprising a particular fatty acid species comprising
(a) providing a composition and a particular fatty acid species;
(b) providing an enzyme capable of selectively adding (esterifying) the fatty acid species of (a) to the composition; and
(c) contacting the composition with the enzyme of (b) under conditions wherein the enzyme selectively adds (esterifies) at least one fatty acid species molecule to the composition, thereby making a composition having at least one or an additional fatty acid species molecule.

### Claim 45 (depends on 44)

The method of claim 44, wherein the composition comprises an oil.

### Claim 46 (depends on 45)

The method of claim 45, wherein the oil comprises a plant oil, an animal oil or a microbial oil.

### Claim 47 (depends on 46)

The method of claim 46, wherein the plant oil comprises a vegetable oil.

### Claim 48 (depends on 45)

The method of claim 45, wherein the oil is derived from a plant oil, a high phosphorous oil, a soy oil, a canola oil, a palm oil, a cottonseed oil, a corn oil, a palm kernel-derived oil, a rice bran oil, a coconut oil, a peanut oil, a sesame oil, a fish oil, an algae oil, a sunflower oil, an essential oil, a fruit seed oil, a grapeseed oil, an apricot oil, or a borage oil.

### Claim 49 (depends on 44)

The method of claim 44, wherein the composition comprises a glyceride, a glycolipid, a phospholipid, a sphingolipid, a coenzyme A, an oxidized lipid or an ether lipid.

### Claim 50 (depends on 44)

The method of claim 44, wherein the composition comprises a small molecule, a protein or a carbohydrate.
